枸杞子青海量大寧夏歷史久 哪個(gè)產(chǎn)地含量更優(yōu)？

【天地網(wǎng)訊】

　　枸杞子為茄科植物寧夏枸杞(LyciumbarbarumL.)和枸杞(L.Chinese)的干燥成熟果實(shí), 是馳名中外的名貴中藥材和保健品。在我國(guó)主要種植地區(qū)有寧夏、青海、甘肅、新疆、內(nèi)蒙古和河北等, 但由于生態(tài)環(huán)境和氣候等因素的影響, 枸杞的品質(zhì)表現(xiàn)出一定差異?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為, 在枸杞的化學(xué)成分中,有藥理作用的主要有枸杞多糖、維生素、氨基酸、黃酮及環(huán)肽類(lèi)等有機(jī)成分, 還有人體必需的微量元素錳(Mn)、鋅(Zn)、鐵(Fe)和硒(Se)等, 它們含量的高低是評(píng)價(jià)枸杞質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要方面。

　　不同產(chǎn)地枸杞子中微量元素和黃酮含量評(píng)測(cè)

　　本實(shí)驗(yàn)選取了11個(gè)不同產(chǎn)地枸杞子, 對(duì)其微量元素Mn、Cu、Zn、Fe和Se及黃酮含量進(jìn)行了分析測(cè)定, 為了解不同產(chǎn)地枸杞子的質(zhì)量提供參考。

　　枸杞樣品來(lái)源及處理，枸杞子樣品取自寧夏中寧、寧夏固原原洲高羊村、寧夏同心、寧夏惠農(nóng)、寧夏平羅頭閘、寧夏銀川南梁、寧夏銀川枸杞研究所、新疆精河、寧夏賀蘭山東麓、青海和河北。樣品用蒸餾水反復(fù)沖洗5 ～6次后, 放入瓷坩堝, 在60～70℃恒溫箱內(nèi)烘干, 然后粉碎過(guò)60目篩,待用。

　　枸杞子中微量元素Mn、Cu、Zn和Fe含量的測(cè)定。樣品的測(cè)定:稱(chēng)取干燥樣品2g(精確至0.0001g), 放入100ml 三角瓶中, 加入18ml濃硝酸, 6ml高氯酸, 溶液呈棕黃色, 瓶口放上小漏斗, 室溫放置過(guò)夜, 于180C電熱板上加熱至溶液澄清, 待大量冒白煙時(shí)取下, 冷至室溫, 溶液若仍顯黃色時(shí)加入1mlH₂O₂ , 再加熱至溶液呈淡黃色或乳白色即可。冷卻后轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中, 1%HNO₃定容到刻度。用原子吸收分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定, 同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。原子吸收分光光度計(jì)工作條件見(jiàn)表1。

表1 　儀器測(cè)定條件

　　標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:按原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定微量元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制原則配制。依表1原子吸收分光光度計(jì)工作條件測(cè)定。

　　枸杞子中微量元素Se 含量的測(cè)定樣品的測(cè)定:稱(chēng)取枸杞試樣2g(精確至0.0001)于燒杯中, 加入25 ml 濃硝酸, 放置過(guò)夜, 次日置于電熱板上低溫消解片刻取下冷卻后緩緩加入6ml高氯酸, 繼續(xù)消解至除去殘余的硝酸, 冷卻后轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中, 以6mol/L HCl定容至刻度, 搖勻后用原子熒光光譜儀測(cè)量Se含量, 同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。原子熒光光譜儀測(cè)量程序見(jiàn)表2。

表2 　原子熒光光譜儀測(cè)量程序

　　標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:按原子熒光光譜儀測(cè)定Se標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制原則配制。依表2原子熒光光譜儀測(cè)量程序測(cè)定。不同產(chǎn)地枸杞子中微量元素和黃酮含量不同產(chǎn)地枸杞子中微量元素Cu,Zn,Mn,Fe和Se及黃酮含量見(jiàn)表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)方差分析后可以看出不同產(chǎn)地枸杞子中微量元素及黃酮含量差異顯著(F0.05=2.18)。用SNK 法進(jìn)一步進(jìn)行兩兩均值比較檢驗(yàn), 同一亞組內(nèi), 含量均值無(wú)明顯差異, 不同亞組間含量均值差異顯著(α=0.05)。11個(gè)產(chǎn)地的枸杞中黃酮含量被分為7個(gè)亞組, 不同產(chǎn)地枸杞子中黃酮含量的趨勢(shì)為:寧夏平羅頭閘<河北<新疆精河<寧夏惠農(nóng)<寧夏固原原洲高羊村, 寧夏賀蘭山東麓, 寧夏中寧<青海, 寧夏銀川枸杞研究所<寧夏同心, 寧夏銀川南梁。黃酮類(lèi)物質(zhì)具有止咳、平喘、祛痰之功效, 并能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈及降低血膽固醇。

表3 　不同產(chǎn)地枸杞子中微量元素和黃酮含量及方差分析(x±s,n=4)

　　11個(gè)產(chǎn)地的枸杞中Mn 含量被分為8個(gè)亞組,微量元素Mn 含量為:寧夏中寧<寧夏固原原洲高羊村, 寧夏惠農(nóng)<寧夏銀川南梁, 寧夏銀川枸杞研究所<寧夏平羅頭閘, 寧夏同心, 新疆精可<寧夏賀蘭山東麓<河北<青海。Cu含量被分為5個(gè)亞組,Cu含量寧夏中寧, 河北, 寧夏固原原洲高羊村, 寧夏平羅頭閘, 寧夏惠農(nóng), 寧夏同心<寧夏銀川南梁<青海<新疆精河<寧夏銀川枸杞研究所, 寧夏賀蘭山東麓。Zn含量被分為7個(gè)亞組, 其含量寧夏中寧, 寧夏平羅頭閘<寧夏惠農(nóng), 寧夏銀川南梁<寧夏固原原洲高羊村<寧夏銀川枸杞研究所<寧夏同心, 寧夏賀蘭山東麓, 青海<新疆精河<河北。Fe含量被分為4個(gè)亞組, 其含量為寧夏中寧, 寧夏平羅頭閘,夏固原原洲高羊村, 新疆精河<寧夏銀川枸杞研究所, 河北<寧夏惠農(nóng), 青海, 寧夏銀川南梁, 寧夏賀蘭山東麓<寧夏同心。Se含量被分為2個(gè)亞組, 它的含量河北, 寧夏銀川枸杞研究所, 寧夏同心, 寧夏惠農(nóng), 寧夏平羅頭閘, 寧夏賀蘭山東麓, 寧夏固原原洲高羊村, 寧夏中寧<寧夏銀川南<新疆精河, 青海。

表4 　不同產(chǎn)地枸杞子中微量元素Zn/Cu 的比值及方差分析

　　不同產(chǎn)地枸杞子中Zn/Cu 的比值不同產(chǎn)地枸杞子中微量元素Zn/Cu的比值及方差分析見(jiàn)表4, 由表可知不同產(chǎn)地枸杞子中微量元素Zn/Cu 比值差異顯著(F0.05 =2.18)。用SNK法進(jìn)行兩兩均值比較檢驗(yàn)(α=0.05), 不同產(chǎn)地枸杞子中微量元素Zn/Cu 的比值被分為4 個(gè)亞組, Zn/Cu 的比值寧夏銀川枸杞研究所, 寧夏賀蘭山東麓<寧夏平羅頭閘, 寧夏銀川南梁, 新疆精河, 寧夏中寧,青海, 寧夏惠農(nóng), 寧夏固原原洲高羊村<寧夏同心<河北。枸杞的生理、藥理活性應(yīng)該是枸杞多糖、維生素、氨基酸、黃酮及環(huán)肽類(lèi)等有機(jī)成分協(xié)同作用的結(jié)果, 對(duì)微量元素的生理作用也不能只單看其絕對(duì)含量, 而應(yīng)結(jié)合其不同元素的比例來(lái)看。據(jù)報(bào)道, 人體多種疾病血清中Zn/Cu 值較低, 了解不同地區(qū)枸杞子Zn/Cu比值, 有很大意義。

　　寧夏同心和寧夏銀川南梁枸杞黃酮含量明顯高于其它地區(qū), 平均含量669.5mg/100g。由此可見(jiàn),黃酮類(lèi)物質(zhì)可能是寧夏枸杞重要的抗氧化成分。寧夏銀川南, 新疆精河和青海枸杞子中含Se較豐富, 平均含量0.143μg/g 。富硒枸杞具有提高人體免疫力、預(yù)防心血管疾病及預(yù)防各類(lèi)腫瘤的作用。

　　不同產(chǎn)地枸杞子中維生素C含量測(cè)定

　　枸杞子中含有豐富的維生素C。維生素C可用于預(yù)防和治療壞血病, 具有清除體內(nèi)自由基增強(qiáng)機(jī)體抵抗力的作用。筆者采用2, 4*二硝基苯肼比色法對(duì)不同產(chǎn)地的枸杞子中維生素C 的含量進(jìn)行了測(cè)定比較?，F(xiàn)報(bào)道如下。

　　加樣回收率的測(cè)定* 移取已知維生素C 含量的內(nèi)蒙枸杞子待測(cè)液2.0mL, 分別加入維生素C 對(duì)照品溶液1.0,2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mL, 按下方法測(cè)定, 計(jì)算加樣平均回收率, 結(jié)果見(jiàn)表5。平均回收率為100.44%, RSD 為2.34%(n=5)。

表5 加樣回收實(shí)驗(yàn)(n= 5)

　　穩(wěn)定性考察* 取維生素C標(biāo)準(zhǔn)工作液(10mg*L^-1)30mL于50mL量瓶中, 用1%草酸稀釋至刻度。移取2mL于具塞試管中, 按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作, 每隔1h 測(cè)定1次A值。在8h內(nèi)的A值分別為0.045, 0.048, 0.040, 0.045, 0.043,0.044, 0.044, 0.045, 穩(wěn)定性好。

　　精密度考察，取10,6,2mg*L^{- 1}的對(duì)照品溶液各2mL, 按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下在540nm處測(cè)定吸收度, 相同室溫下平行測(cè)定3次， 計(jì)算其日內(nèi)、日間的RSD%, 結(jié)果見(jiàn)表2。樣品的含量測(cè)定*稱(chēng)取枸杞子粗粉15.00g, 置于50mL具塞三角瓶中, 加2%草酸20mL浸泡過(guò)夜, 用組織搗碎勻漿機(jī)勻漿。精密稱(chēng)取勻漿15.00g于100mL量瓶中, 加1%草酸稀釋至刻度, 搖勻, 放置5h, 濾過(guò)。移取濾液10mL于具塞三角瓶中, 加1%草酸10mL, 活性炭1角匙, 10min后過(guò)濾。吸取2mL濾液于試管中, 以2mL1%草酸作空白, 以下操作按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下操作。根據(jù)回歸方程計(jì)算維生素C含量[mg*(100g)^-1] , 結(jié)果見(jiàn)表6。枸杞子中維生素C含量測(cè)定法有碘量法、熒光分光光度法、2,6*二氯吲哚酚法等。本文采用2, 4*二硝基苯肼比色法測(cè)定枸杞子中維生素C的含量, 具有簡(jiǎn)單易行、快速準(zhǔn)確的特點(diǎn)。維生素C 是枸杞子中的重要成分之一, 實(shí)驗(yàn)證明, 枸杞子由于產(chǎn)地不同, 其維生素C的含量相差懸殊, 內(nèi)蒙枸杞子中維生素C含量明顯高于河北、山東、寧夏產(chǎn)枸杞子。

表6 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n= 3)

　　不同產(chǎn)地枸杞子中甜菜堿含量的評(píng)測(cè)

　　甜菜堿(betaine)作為枸杞中的一種重要成分，在體內(nèi)起甲基供應(yīng)體的作用，可以抗脂肪肝。

　　通過(guò)對(duì)9個(gè)樣品的甜菜堿峰面積進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)而計(jì)算出各樣品甜菜堿含量，最高為0.5880%，最低為0.3004%，均大于0.3000%，達(dá)到《中國(guó)藥典》2015版規(guī)定標(biāo)準(zhǔn);對(duì)9個(gè)樣品含量進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，不同枸杞子甜菜堿含量存在差異，見(jiàn)表7。由表7可以看出，甘肅永登縣上川鎮(zhèn)所產(chǎn)枸杞子的甜菜堿含量為0.4325%，在所有供試樣品中列第3位，處于較高水平; 對(duì)不同產(chǎn)地的枸杞子樣品進(jìn)行品種內(nèi)對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地的同一品種枸杞子，甜菜堿含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中寧夏所產(chǎn)枸杞子除平羅縣頭閘鎮(zhèn)樣品外，甜菜堿含量均較高，整體處于優(yōu)勢(shì)地位，其中就包括最高的中寧縣舟塔鄉(xiāng)所產(chǎn)枸杞子，甜菜堿含量為0.5880%;此外對(duì)不同品種的枸杞子進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，品種不同甜菜堿含量差異明顯，其中甘肅景泰縣草窩灘鄉(xiāng)所產(chǎn)“蒙杞1號(hào)”枸杞子，甜菜堿含量為0.4045%，處于中等偏上水平，而青海諾木洪農(nóng)場(chǎng)的“柴杞”則含量較低。

表7 不同產(chǎn)地枸杞子甜菜堿含量比較

　　供試樣品枸杞子的色譜圖呈現(xiàn)不同程度的差異，同品種枸杞子中亦有較多色譜圖相似度較差，證明產(chǎn)地條件對(duì)枸杞子甜菜堿色譜圖的特征性有影響。9個(gè)不同枸杞子樣品中甜菜堿含量有明顯差異，其中同品種“寧杞1 號(hào)”枸杞甜菜堿含量從0.3004%到0.5880%不等，而部分“寧杞1號(hào)”枸杞子與“蒙杞1號(hào)、“柴杞”甜菜堿含量差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，證明同一枸杞子品種產(chǎn)地不同其甜菜堿含量有差異、不同枸杞子品種間甜菜堿含量也存在不同程度的差異，產(chǎn)地條件與品種因素對(duì)甜菜堿含量都有影響，這與前人部分研究結(jié)論一致。

　　在進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定時(shí)，曾選用C₁₈色譜，但效果較差，分析其原因可能是由于甜菜堿為季胺型水溶性生物堿，極性較大所致，故選擇NH2色譜柱，結(jié)果分離效果良好; 實(shí)驗(yàn)中還分別在檢測(cè)波長(zhǎng)195，210，230nm下進(jìn)行色譜分析，結(jié)果在230nm下各組分色譜峰均有較大吸收。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步肯定了HPLC 在測(cè)定枸杞子甜菜堿含量方面準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好的優(yōu)勢(shì); 研究主體甘肅永登縣上川鎮(zhèn)所產(chǎn)枸杞子的甜菜堿含量在9個(gè)樣品中處第3位，就甜菜堿這一藥用成分而言品質(zhì)較優(yōu)，這一結(jié)果有助于日后在甘肅省秦王川地區(qū)繼續(xù)開(kāi)展枸杞的栽培與選育工作。

　　不同產(chǎn)地枸杞子中5個(gè)酚酸類(lèi)成分的評(píng)測(cè)

　　有關(guān)枸杞化學(xué)成分的研究有多糖、甜菜堿、黃酮、原花青素、β-胡蘿卜素、東莨菪內(nèi)酯、農(nóng)藥殘留、枸杞子中脂溶性成分以及中藥處方中枸杞子的定性鑒別等。

　　取所收集的不同產(chǎn)地的枸杞子，按方法制備供試品溶液。按色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品中原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、咖啡酸和阿魏酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表8～10。在線凈化——可以簡(jiǎn)化或免去后續(xù)的凈化過(guò)程ASE是多組分高效萃取技術(shù)，在萃取過(guò)程中一些干擾物質(zhì)有時(shí)會(huì)被一起萃取出來(lái)，這些共萃取物可能會(huì)干擾分析或損害分析儀器。在供試品溶液制備中若直接加50%甲醇水溶液提取，經(jīng)HPLC分析發(fā)現(xiàn)色譜峰很多，枸杞子中的脂類(lèi)物質(zhì)對(duì)部分酚酸類(lèi)化合物成分造成一定干擾，無(wú)法分離，且脂溶性成分會(huì)附著在專(zhuān)用的色譜柱中，對(duì)色譜柱造成一定的損害。故在用50% 甲醇水溶液提取前先加除脂溶劑石油醚，以除去大部分的脂溶性成分，減免干擾峰的出現(xiàn)，使各酚酸類(lèi)成分與其他雜質(zhì)峰分離度均大于1.5。

　　ASE提取條件的選擇(1)提取溶劑: 考察了乙醇，40%、50%、60%甲醇水溶液;(2)提取溫度:考察了40、50、60、70℃；(3)提取靜置時(shí)間：考察5、10、15、20、30min;(4)提取循環(huán)次數(shù): 考察了1、2、3、4次。結(jié)果表明在60℃下用50%甲醇水溶液靜置提取15min，循環(huán)提取1次時(shí)提取效率最高。

　　色譜條件的選擇(1) 在對(duì)流動(dòng)相等條件考察時(shí)發(fā)現(xiàn)，等度洗脫分析時(shí)間較長(zhǎng)，且極性相近的成分較多，對(duì)測(cè)定組分有一定的干擾，故選用梯度洗脫。不僅達(dá)到物質(zhì)色譜峰的分離度要求，而且大大減短了出峰時(shí)間;(2)對(duì)不同的流動(dòng)相乙腈-水、甲醇-水和甲醇-0.04%冰乙酸水溶液洗脫體系進(jìn)行了考察，經(jīng)分析可知甲醇-0.04%冰乙酸水溶液洗脫體系可達(dá)到分離度要求。加入一定量的冰乙酸抑制了酸的解離，使色譜峰形較佳，故選用甲醇-0.04% 冰乙酸水溶液。(3)在190～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。通過(guò)對(duì)色譜圖的分析，結(jié)果各酚酸類(lèi)成分在280nm 附近出峰多，面積大，且各色譜峰分離度良好，故選280nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

　　結(jié)果分析由實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果可知：(1)所有樣品中5個(gè)酚酸平均含量大體上依次為表兒茶素>原兒茶醛>兒茶素> 咖啡酸>阿魏酸，但也有特例;(2)不同產(chǎn)地樣品中總酚酸含量大體上依次為部分青海樣品>內(nèi)蒙古>寧夏>甘肅> 新疆，但也有部分青海產(chǎn)地枸杞子中總酚酸含量較低;(3)同產(chǎn)地樣品不同種之間總酚酸含量有所差異: 野生枸杞子依次為紅果枸杞子>黃果枸杞子>黑果枸杞子，而種植枸杞子依次為黃果枸杞子>黑果枸杞子>紅果枸杞子;(4)同產(chǎn)地不同野生和人工栽培樣品中總酚酸含量不一: 青海德令哈尕海鎮(zhèn)樣品總酚酸含量人工栽培>野生，具有顯著性差異; 青海都蘭縣諾木洪樣品總酚酸含量人工栽培與野生枸杞子相當(dāng)，無(wú)顯著性差異。

　　有文獻(xiàn)報(bào)道“固相萃取快速測(cè)定黑果枸杞果汁中酚酸類(lèi)化合物”，該文章測(cè)定的是黑果枸杞Lycium ruthenicum Murr. 果汁中6個(gè)酚酸類(lèi)成分沒(méi)食子酸、原兒茶素、兒茶素、綠原酸、咖啡酸和丁香酸的含量，包括本文中的酚酸類(lèi)成分兒茶素和咖啡酸，但其他成分不同。本文使用快速溶劑萃取儀(ASE350) 用50%甲醇水溶液提取出枸杞子中酚酸類(lèi)成分原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、咖啡酸和阿魏酸，并采用RP-HPLC法對(duì)其進(jìn)行了含量測(cè)定，擴(kuò)充了枸杞子中其他酚酸類(lèi)成分。結(jié)果原兒茶醛、兒茶素、表兒茶素、咖啡酸和阿魏酸的濃度分別在

　　24.05～601.2mg·L-1、4.396～109.9mg·L-1、17.06～426.6mg·L-1、0.7104～17.76mg·L-1、1.085～27.12 mg·L-1 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系;平均加樣回收率(n=6) 分別為97.4%、97.7%、98.7%、95.5%、96.3%。本方法快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，適用于枸杞子中5 個(gè)酚酸類(lèi)成分的含量測(cè)定，可為枸杞的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

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